大鼠小腸平滑肌原代細(xì)胞

使用方法
大鼠小腸平滑肌原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟主要如下：

產(chǎn)品相冊(cè)

注意事項(xiàng)
大鼠小腸平滑肌原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分離和培養(yǎng)步驟：

       1. 小鼠頸椎脫臼處死后，剃除腹胸部的被毛，放入裝有75%酒精的燒杯中浸泡5min。

       2. 取出小鼠，在無(wú)菌環(huán)境下打開(kāi)胸腔，取出心臟組織，注入盛有無(wú)菌1×PBS的培養(yǎng)皿中，洗凈組織表面的血液。

       3. 將清洗干凈的心臟組織轉(zhuǎn)入裝有75%酒精的培養(yǎng)皿中浸泡15s以殺死大多數(shù)的心臟被膜細(xì)胞，浸泡完成后立即轉(zhuǎn)入裝有無(wú)菌1×PBS的培養(yǎng)皿中震蕩清洗。

       4. 清洗完成后，用剪刀鑷子配合除去主動(dòng)脈弓和心房組織，僅保留心室部分，再次用1×PBS清洗去除心室內(nèi)的血液。

       5. 將清洗干凈的心室組織用剪刀減成1mm3大小左右的碎塊，之后用PBS清洗若干次后按下述兩種方法之一進(jìn)行后續(xù)操作。

       A.貼塊法

       6. 將清洗好的碎塊轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)皿中，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡組織，室溫消化3-5min。

       7. 消化完成后，添加數(shù)毫升FBS終止消化，之后吸棄液體，加PBS清洗組織塊1伺次后，用200ul吸頭將組織塊平均接種于T-25培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面上，之后將培養(yǎng)瓶放置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中，靜置2-4h。

       8. 待組織處于略微脫水的狀態(tài)時(shí)，小心添加2ml完全培養(yǎng)基，添加時(shí)注意盡量不要將組織塊沖起，要使培養(yǎng)基接觸所有的組織塊。

       9. 之后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，一般2-4天后成纖維細(xì)胞會(huì)從組織塊周?chē)�爬出，待爬出的�?xì)胞有較多數(shù)量時(shí)，可將細(xì)胞消化下來(lái)，去除組織塊，轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

       B.消化法

       6. 將清洗好的碎塊轉(zhuǎn)入另一離心管中，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型膠原酶）37℃水浴消化8min后，吸取上層混懸液棄去。

       7. 余下組織加入混合消化液10ml，37℃水浴震蕩消化10min；吸取上層懸液至另一離心管中，加入適量FBS終止反應(yīng)；剩余沉淀物再加消化液消化3-5次，直至組織塊完全消化。

       8. 按1∶1加入含血清的培養(yǎng)基，中止酶反應(yīng)，懸液過(guò)150目網(wǎng)篩去除較大的組織塊。

       9. 收集全部中止后的消化液于離心管中，300g，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞后計(jì)活細(xì)胞數(shù)。

      10. 調(diào)整細(xì)胞密度以1× 106個(gè)/ml 接種入的T-25培養(yǎng)瓶中，每瓶添加2ml細(xì)胞懸液。

      11. 培養(yǎng)瓶放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置40min后，吸棄上清液以去除未貼壁的非成纖維細(xì)胞和死細(xì)胞，再添加5ml完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

      售后服務(wù)

       除了上述的細(xì)胞分離方法以外，還有很多關(guān)于其他細(xì)胞的分離方法，想要學(xué)習(xí)的小伙伴可以進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)學(xué)習(xí)，如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法，可在購(gòu)買(mǎi)相應(yīng)的大鼠小腸平滑肌原代細(xì)胞過(guò)程中，贈(zèng)送該細(xì)胞的分離方法及培養(yǎng)條件，想要了解更多，打電話(huà)或咨詢(xún)相關(guān)工作人員。