產(chǎn)品規(guī)格：以IHC 工作液每個樣品用量為50ul 來計算，按照最低稀釋比例1:400 來
計算，本試劑盒中一抗規(guī)格50ul 可以檢測200 個樣品左右。
保存條件：不使用時取試劑盒中一抗保存-20℃，其他均保存2-8 ℃
試劑盒特點：該試劑盒具有靈敏度高，特異性強、背景清晰、成本低廉等特點，是
理想的免疫組化染色試劑盒。適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細胞涂片，可用
于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性抗原。
溫馨提示：本檢測試劑盒適用于人、大小鼠，兔等絕大多數(shù)組織，但對于內(nèi)源性生
物素含量比較豐富的組織（如腎臟、肝臟等），應選用非生物素檢測系統(tǒng)，或用avdin
封閉。
試劑盒所含試劑：
1、貨號：YS0470R ，Anti-Osteocalcin，50ul（應用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 ）
2、貨號：SP-0023 ，3% H2O2 去離子水（無色）6ml（內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑）
3、貨號：SP-0023-A，Blocking Solution（藍色）6ml（封閉用正常山羊血清工作液）
4、貨號：SP-0023-B Go Anti-Rb IgG/Bio（黃色）6ml（二抗工作液生物素標記羊抗兔IgG）
5、貨號：SP-0023-C，Streptavidin/HRP （橙色）6ml（辣根酶標記鏈酶卵白素工作液）
6、貨號：G02-04001，DAB 顯色液B 液（20×） 20ml
7、貨號：G02-04002，DAB 顯色液A 液（20×） 1ml
8、貨號：C01-04001 ，抗體稀釋液30ml
用戶自備試劑（用戶自行購買，亦可咨詢我公司客服購買）：
一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)緩沖液：
PBS（phosphate buffered solution）即磷酸鹽緩沖液，能夠提供相對穩(wěn)定的
離子環(huán)境和pH 緩沖能力，是生物學中經(jīng)常使用的緩沖鹽溶液，用于分子克隆及細胞
培養(yǎng)等，pH 為7.2-7.4，與人體血液等滲，主要成分為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、
氯化鈉以。
二、檸檬酸鈉抗原修復液：
可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定
后的抗原修復�？梢杂行コ╊惞潭ㄔ噭⿲е碌牡鞍字g的交聯(lián)，充分暴露石蠟
切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。
抗原修復方法：
骨鈣素免疫組化試劑盒方法1：沸水浴修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境，保持外部沸騰
狀態(tài)15min，自然冷卻至室溫。
方法2：微波修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，停火3min，
中火5min，自然冷卻至室溫。
方法3：高壓修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于高壓鍋，上汽后修復2-5min，
然后將高壓鍋置入涼水中，減壓至正常后取出玻片
- 2 -
抗原修復注意事項：
1）脫蠟水化的切片，應避免因切片干燥，而至非特異性染色。
2）熱修復操作時務必謹慎，當心燙傷。
3）熱修復時間過長易導致脫片，請注意控制時間。
三、DAB（二氨基聯(lián)苯胺）染色液：
過氧化物酶將使底物發(fā)生反應，于反應部位產(chǎn)生棕色沉淀物。標本顯色時間一
般為室溫5~20 分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色況，顯色充分后應將標本及時脫水封
固。
實驗前準備：
一）一抗稀釋的準備：
本試劑盒中一抗稀釋液適用于免疫組織化學與免疫印跡等實驗一抗的稀釋，產(chǎn)
品添加了抗體保護劑、穩(wěn)定劑等成分，有效增加了稀釋后一抗的穩(wěn)定性，減少抗體
非特異性吸附。
使用說明：按照抗體推薦效價（或個人優(yōu)化條件），將適量抗體加入抗體稀釋液即
可。例如，效價為1：100 時，可將10ul 抗體加入到1ml 抗體稀釋液中，充分混勻
后即可使用。抗體最好現(xiàn)用現(xiàn)稀釋，稀釋后的抗體2-8℃可以短期保存，但抗體的
效價會隨時間而降低。。
二）DAB 顯色液的制備實驗準備：在1 毫升試劑E（DAB 底物液）中，加入1 滴（約
50 微升）試劑D（DAB 濃縮液），混合均勻，即配成DAB 工作液。此溶液必須現(xiàn)用
現(xiàn)配，配好后避光保存，6 小時內(nèi)使用，剩余的液體應棄去。標本顯色時間一般為
室溫5~20 分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色的情況，顯色充分后應將標本及時脫水封
固。
骨鈣素免疫組化試劑盒實驗步驟（建議方案）：
1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復，在此步驟后進行）。
3、3%雙氧水（H2O2）去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧
物酶活性。
4、滴加試劑A（藍色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。
5、滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要，可進行復染，脫水，透明。
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術服務的生物企業(yè)。包括分子生物學、免疫學、微生物學、細胞學等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務、信譽”的精神，堅持以優(yōu)良的技術、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時，也建立了一套集技術支持，物流售后服務等多部門聯(lián)動服務體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務提供給每一個客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點實驗室廣泛使用，深受廣大科研人員好評，先后在權威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務周到。
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