ProFlex™ PCR是一款獨(dú)一無二的熱循環(huán)儀,可由三名用戶同時(shí)遠(yuǎn)程控制三個(gè)獨(dú)立的模塊,有助于使您實(shí)驗(yàn)室的PCR實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)可視化、可控化和正規(guī)化。
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人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒參數(shù):
編號 | 中文名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
F2637-A | 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒 | Human soluble endothelial protein C receptor,sEPCR elisa Kit | 48T |
人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒技術(shù)流程ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。然而,影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。
主要優(yōu)點(diǎn)1、簡易操作、高效、靈敏、特異的抗體;2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;5、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
使用方法1、 血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作步驟1:雙抗體夾心法1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。操作步驟2:間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;2.次日洗滌3次;3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;4.(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;6.’最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
應(yīng)用信息ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四個(gè)方面:1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。2、研究抗酶抗體的合成。3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。編輯本段進(jìn)口分裝進(jìn)口分裝:檢測范圍和靈敏度不同,用量少時(shí),可使用分裝,前期是它的長久性不是很好。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.99。試劑盒重復(fù)性好,板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于9 %。試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測,避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗(yàn)操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。白介素6是一種細(xì)胞因子,已被證實(shí)為B細(xì)胞分化因子.它是一種抗體形成系統(tǒng),它的生理特性,如肝細(xì)胞急性蛋白合成的誘導(dǎo)和基于和白介素3協(xié)同作用的生長刺激等,也備受關(guān)注. 并且已證實(shí)白介素-6與病理學(xué)存在穩(wěn)定的相關(guān)關(guān)系.例如,報(bào)道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細(xì)胞能合成白介素-6并表達(dá)白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細(xì)胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運(yùn)用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強(qiáng)度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94 700 pg/mL [2]預(yù)期用途此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測試劑盒成分1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T2 酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 13 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 15 標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 16 顯色劑: TMB底物液 15mL x 17 終止液: 1N硫酸 12mL x 18 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)[3]
注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 個(gè)月
實(shí)時(shí)熒光定量PCR簡介 熒光定量PCR全攻略 引物合成訂單下載 | |||
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熒光定量PCR檢測技術(shù)從誕生到現(xiàn)在已經(jīng)有 8 年了,但是其應(yīng)用在近四年才迅猛增長。在Medline 數(shù)據(jù)庫中,用“ Taqman” 或 ”real time PCR”作為關(guān)鍵詞檢索,在1996年僅有19篇,在1997年僅有28篇,在98 、 99 、2000 年分別達(dá)到了52 、157 、409篇, 2003年已經(jīng)達(dá)到2984篇,相信在不久的將來會有更多的文章發(fā)表。針對實(shí)時(shí) PCR 這一熱點(diǎn)領(lǐng)域,閃晶公司對它進(jìn)行了深入細(xì)致的研究,并且及時(shí)地為廣大科研人員推出這項(xiàng)技術(shù)服務(wù)。
熒光定量PCR基本原理 • Taqman 技術(shù):該技術(shù)以美國 ABI 公司為代表。 PCR 擴(kuò)增時(shí),在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光報(bào)告基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán),探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收, PCR 儀檢測不到熒光信號; PCR 擴(kuò)增時(shí)(在延伸階段), Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條 DNA 鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與 PCR 產(chǎn)物形成完全同步,這也是定量的基礎(chǔ)所在。
相關(guān)鏈接......ABI公司Taqman探針MGB探針Sybr green I染料ROX染料Taq酶(熒光定量PCR專用)熱啟動(dòng)酶熱啟動(dòng)熒光PCR定量核心試劑盒熒光定量PCR一步法RT-PCR試劑盒TrizolRNA提取試劑UNG酶標(biāo)準(zhǔn)品克隆定點(diǎn)突變亞克隆dUTP
• Beacon 技術(shù):該技術(shù)以美國人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針,但它是 環(huán)狀的寡核苷酸探針,分別由莖部和環(huán)部組成, 兩端分別標(biāo)記 熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光猝滅基團(tuán),在無靶序列的情況下,探針始終是環(huán)狀,報(bào)告基團(tuán)的熒光被猝滅基團(tuán)猝滅,使熒光檢測儀檢測不到熒光信號;而在有靶序列時(shí),即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結(jié)合,使熒光報(bào)告基團(tuán)和猝滅基團(tuán)分開,這樣熒光儀可以檢測到熒光,熒光信號的強(qiáng)弱代表了靶序列的多少。
相關(guān)鏈接......分子信標(biāo)知識介紹
• FRET 技術(shù):該技術(shù)以 Roche( 羅氏公司 ) 為代表。它的基本原理是:兩條直線型寡核苷酸探針,其中一條的 3 ‘端標(biāo)記熒光激發(fā)基團(tuán),另一條的 5 ' 端標(biāo)記熒光檢測基團(tuán),在無靶序列的情況下,兩條探針分開,無法進(jìn)行能量的傳遞,這樣熒光儀不能檢測到熒光信號;而當(dāng)有靶序列時(shí),即在 PCR 的退火階段兩條探針與靶序列結(jié)合,使得兩條探針上的熒光基團(tuán)可以進(jìn)行能量的傳遞,這樣熒光儀就可以檢測到熒光信號,熒光信號的強(qiáng)弱代表了靶序列的多少。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR中的幾個(gè)俗語 • Ct 值:是指每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。(如圖所示)
• 熒光域值( threshold ):是指 PCR 反應(yīng)的前 15 個(gè)循環(huán)的熒光信號,熒光域值的缺省設(shè)置是 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的 10 倍,即: threshold.• Ct 值與起始模板的關(guān)系:研究表明,每個(gè)模板的 Ct 值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系〔 1 〕,起始拷貝數(shù)越多, Ct 值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù),縱坐標(biāo)代 Ct 值(如圖 2 所示)。因此,只要獲得未知樣品的 Ct 值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。
熒光定量PCR應(yīng)用廣泛 • 可以對各種基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析,如:同一基因在不同組織中的表達(dá)差異、同一基因在不同藥物處理后的表達(dá)差異、轉(zhuǎn)基因食品的檢測。過去最常用的高通量篩選基因表達(dá)差異的技術(shù)是 cDNA 芯片和差異顯示,但這兩種技術(shù)的缺點(diǎn)是只能定性而非完整意義上的定量分析。實(shí)時(shí) PCR 技術(shù)和高通道實(shí)時(shí) PCR 儀的出現(xiàn),無疑為這種檢測提供了極大的方便。 • 可以進(jìn)行點(diǎn)突變分析和等位基因分析,用不同的熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記 Taqman 探針,然后分別與野生型和突變型雜交,如果一種熒光信號明顯強(qiáng)于另一種熒光信號,則表明它是純合子;如果兩種熒光信號都明顯增強(qiáng),則表明它是雜合子。另外分子信標(biāo)( Molecular Beacon)就是專門為這種技術(shù)設(shè)計(jì)的探針。 • 可以進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性的分析,檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個(gè)體對不同疾病的易感性或者個(gè)體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義,因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性,一旦 SNP 的序列信息是已知的,采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的 SNP 檢測將會變得簡單而準(zhǔn)確。 • 可以進(jìn)行 DNA 甲基化檢測, DNA 甲基化同人類的許多疾病有關(guān),特別是癌癥, Laird 報(bào)道了一種稱作 Methylight 的技術(shù),在擴(kuò)增之前先處理 DNA ,使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影響,用特異性的引物和 Taqman 探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA ,這種方法不僅方便而且靈敏度更高。 • 對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,這在我國應(yīng)用比較廣泛,大家比較熟悉。許多生產(chǎn)臨床PCR 試劑的廠商已經(jīng)陸續(xù)推出了一系列的診斷試劑,如:肝炎系列、性病系列、腫瘤系列等等。
• 閃晶生物同時(shí)提供藥物伴隨診斷(companion diagnostic)方法如EGFR、BRAF V600E突變、HER2 擴(kuò)增、BCR-Abl、PML-RAR、ALK融合基因等。
熒光定量PCR技術(shù)服務(wù) (含lncRNA熒光定量PCR-環(huán)狀RNA熒光定量PCR)熒光定量PCR用Taqman方法對DNA/RNA進(jìn)行real time PCR的定量測定或型的鑒定。
熒光定量PCR服務(wù)要求1. 請您提供新鮮的且盡量多的材料(各種材料的RNA提取量請參照“總RNA 的提取”),或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/ 樣品);(各種材料的DNA提取量請參照“ DNA的提取”),或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/ 樣品)。 2. 請通過E-mail提供已知的全長基因序列。3. 請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等
熒光定量PCR操作程序 1. 根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。 2. 提取DNA/RNA 。 3. Real Time PCR(熒光定量PCR),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 4. 實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料
熒光定量PCR收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) 1、RNA提。10-20個(gè)樣品的RNA提取是:150元/個(gè);20-30個(gè)樣品的RNA提取是:120 元/個(gè);30個(gè)以上樣品的RNA提取是:100元/個(gè);每份材料最少應(yīng)提供:100mg/樣品2、一個(gè)指標(biāo)每個(gè)樣品為150元;二個(gè)指標(biāo)每個(gè)樣品為240元;三指標(biāo)每個(gè)樣品為300元,三個(gè)指標(biāo)以上每個(gè)樣品為80元/反應(yīng)。3、引物合成為每個(gè)堿基2.1元,探針標(biāo)記為1200元/條,如果是用sybr green I(染料)做,則免去探針的費(fèi)用,染料贈送。4、內(nèi)參的GAPDH引物探針免費(fèi),標(biāo)準(zhǔn)曲線免費(fèi)贈送。5、不再收取任何的基礎(chǔ)費(fèi)或者開機(jī)費(fèi)。
人(sEPCR)kit,可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Elisa試劑盒本試劑僅供研究使用 Elisa kit規(guī)格:48孔配置/96孔配置標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶酶標(biāo)試劑:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)
特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期:6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
人(sEPCR)kit,可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Elisa試劑盒樣本處理及要求:1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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Mycoplasma, the smallest and self-replicating prokaryotes, are common contaminant of primary and continuous cell line cultures. It has been shown that micoplasma contamination affects cell growth, morphology and metabolism. Because of their small size and flexibility, mycoplasma can pass through commonly used filters of 0.2 μm. Furthermore, unlike bacterial and fungi, micoplasma contamination is resistant to commonly used antibiotics, and not easy to be spotted visually. These drawbacks emphasize the need for regular screening in control of mycoplasma contamination. Conventional screening methods include microbiological culture, fluorescent DNA staining and biochemical detection methods. However, mycoplasma culture is restricted to specialized laboratories and takes 2-4 weeks. Results of DNA fluorochrome staining are difficult to interpret due to the presence of broken nuclei. Various biochemical detections are time consuming and often lack of sensitivity. Recently, polymerase chain reaction (PCR) based methods have been developed as a quick and convenient detection of low level mycoplasma infection, which offers great advantage over the conventional methods because of its extreme sensitivity and specificity. Computer alignment studies of mycoplasmal 16S rRNA sequences have revealed the existence of highly conserved sequences. Primers designed according to these sequences allow the specific amplification of mycoplasma DNA fragment and thus highly sensitive detection of mycoplasma. ScienCell™ Mycoplasma PCR Detection Kit is a 16S rRNA-based PCR assay including 2X reaction buffer, primer set, as well as internal amplification control (IAC) and positive sample control. The genus-specific primer set we select recognizes the five typical contaminating mycoplasma species (i.e. M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. fermentans, and A. laidlawi), which account for 98% of contaminations, as well as members of the genera Ureaplasma, Spiroplasma, and Acholeplasma, which account for the remaining 2% of contaminations. Eukaryotic and bacterial DNA is not amplified by this kit. The IAC is designed to be co-amplified simultaneously with the target mycoplasma sequence by the same set of primers. The resulted control band, which is distinguished from the target band by a difference in molecular mass, indicates the occurrence of DNA amplification. Therefore, false negative results due to the presence of PCR inhibitors in some cell cultures can be identified. Our kit also provides a positive sample control, which is noninfectious genomic DNA (gDNA) of M. fermentans. On the other hand, a no template (i.e. DNA-free DI H2O) negative sample control can help to determine whether there is a false positive result due to carry-over contamination. Each experiment should include both positive and negative sample controls, as well as the IAC.Product Use
This assay kit is used to detect mycoplasma in vitro. It is for research use only. Not for use in animals, humans, or diagnostic procedures.
兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體ELISA試劑盒價(jià)格,現(xiàn)貨兔sEPCR試劑盒開學(xué)特價(jià)迎開學(xué),大促銷!特價(jià)低價(jià),廠家價(jià)格,可以享受特價(jià)/折上折等優(yōu)惠!期待您的來電:【elisa試劑盒訂購熱線】電話:15810802415 座機(jī): QQ:
【產(chǎn)品名稱】Gene-Explorer國產(chǎn)雙槽智能普通型基因擴(kuò)增儀PCR儀
【產(chǎn)品型號】Gene-Explorer雙槽智能:GE9611/4831/6021/3841/4851
【關(guān)鍵詞】PCR儀,擴(kuò)增儀,基因擴(kuò)增儀,PCR基因擴(kuò)增儀,PCR儀
【產(chǎn)品介紹】
產(chǎn)品型號 | GE9611/4831/6021/3841/4851 普通型 |
樣本容量 Capacity | 96×0.2ml,60×0.5ml,Double48×0.2ml, 48×0.2ml+30×0.5ml,384well,In-situ Plate |
溫度范圍 Temperature Range | 0~<100℃> |
大升溫速率 Heating Rate | <4℃>/s |
大降溫速率 Cooling Rate | <3℃>/s |
溫度均勻性 Uniformity | ≤±<0.2℃> |
溫度性 Accuracy | ≤±<0.1℃> |
溫度顯示分辨率 Display Resolution | <0.1℃> |
溫度控制方式 Temperature Control | Block\\Tube |
變溫速率可調(diào) Ramping Rate Adjustable | 0.1~<2.5℃> |
梯度溫度均勻性 Gradient Uniformity | / |
梯度性Gradient Accuracy | / |
梯度溫度范圍 Gradient Temp. Range | / |
梯度設(shè)置范圍 Gradient Spread | / |
熱蓋溫度范圍 Hot Lid Temperature | 30~<110℃> |
熱蓋高度調(diào)節(jié) Hot Lid Height Adjustable | 無級可調(diào) Stepless Adjustable |
程序存儲數(shù)量 Number of Programs | 1000 +(USB FLASH) |
程序大步驟 Max.No.of Step | 30 |
程序大循環(huán)數(shù) Max.No.of Cycle | 100 |
時(shí)間遞增/遞減 Time Increment/Decrement | 1 Sec ~ 9 Min 59 Sec |
溫度遞增/遞減 Temp. Increment/Decrement | 0.1~<9.9℃> |
程序暫停功能 Pause Funcation | 有 Yes |
掉電數(shù)據(jù)保護(hù) Auto Data Protection | 有 Yes |
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