人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)的含量。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)水平。用純化的人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7),再與HRP標(biāo)記的S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)濃度。
試劑盒組成:
(20ml×20倍)×1瓶 |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為72ng/ml,48 ng/ml ,24 ng/ml,12ng/ml, 6ng/ml)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
計算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
(此圖僅供參考)
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%
檢測范圍:
2ng/ml -90 ng/ml
保存條件及期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.期:6個月
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產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T實驗樣本:血清、血漿、細(xì)胞上清液、組織等。
檢測種屬:人、大小鼠、兔子等
保存條件:2~8℃,有效期6個月。
研究領(lǐng)域:炎癥研究、神經(jīng)生物學(xué)、新陳代謝、信號通路、免疫學(xué)、傳染病、其他研究。
供應(yīng)貨期:現(xiàn)貨
產(chǎn)品特點:經(jīng)測定,試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存,其活性降低率小于5%。為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響,實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致,尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。
優(yōu)勢:
1、采用全進(jìn)口原料和抗體:高效、靈敏、特異,嚴(yán)格引進(jìn)國際技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行批量生產(chǎn)。
2、先進(jìn)的優(yōu)化方案:穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性。
3、提供免費代測服務(wù)(為客戶提供來樣檢測服務(wù),最大限度實驗結(jié)果的有效性)
4、產(chǎn)品質(zhì)量保證,提供全程技術(shù)指導(dǎo)。友情提示:僅供科研實驗,不得用于臨床;使用前仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書。其他相關(guān)產(chǎn)品:
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上海茁彩生物科技有限公司,以為生命科學(xué)工作者提供全方位高水準(zhǔn)的產(chǎn)品及技術(shù)服務(wù)為經(jīng)營宗旨,有別于眾多國內(nèi)企業(yè)單純代理貿(mào)易的簡單運營模式,更加強(qiáng)調(diào)高端技術(shù)的掌握和優(yōu)化。強(qiáng)調(diào)良好的售后服務(wù)和技術(shù)支持,努力打造中國知名品牌。上海茁彩生物科技有限公司,是一家專注于免疫檢測類試劑的高科技生物公司,主營產(chǎn)品為主營產(chǎn)品為ELISA試劑盒、熒光定量PCR試劑盒、蛋白、抗體和其他配套試劑。我們一直堅持質(zhì)量的穩(wěn)定是生存的根本,我們更注重高品質(zhì)的服務(wù),把每一個客戶當(dāng)做自己事業(yè)上的伙伴!有任何問題,歡迎前來咨詢,感謝!
白介素1α、白介素1β、白介素1 F5、白介素2、白介素4、白介素6、白介素8、白介素10、白介素15、白介素21、轉(zhuǎn)化生長因子β1、轉(zhuǎn)化生長因子β2、轉(zhuǎn)化生長因子β3、免疫球蛋白G、成纖維細(xì)胞生長因子
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JEH-01 | Human CCL2/MCP-1 ELISA KIT | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-02 | Human IL-1β ELISA KIT | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-03 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-04 | | 96T/48T | 2200.00 |
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JEH-07 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-08 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-09 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-010 | | 96T/48T | 2200.00 |
一.大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)elisa試劑盒現(xiàn)貨原理及用途
大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人甲型肝炎抗原(HAA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人甲型肝炎抗原(HAA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
二.技術(shù)參數(shù)規(guī)格
產(chǎn)品名稱:大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)ELISA試劑盒現(xiàn)貨
品牌:臻科生物
規(guī)格:48T/ 96T
產(chǎn)品特點:高效性、靈敏度高、吸附性強(qiáng)、特異型性好。
適用范圍:產(chǎn)品僅供科研實驗包括臨床的標(biāo)本做課題,不可用于臨川診斷。儲存方式:2-8攝氏度冷藏
供應(yīng)的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物、魚ELISA試劑盒等等
三.大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)ELISA試劑盒現(xiàn)貨獨特優(yōu)勢
1、產(chǎn)品種類齊全、質(zhì)量可靠、價格優(yōu)惠、靈敏度高、效果穩(wěn)定、易保存、操作簡便
2、免費提供產(chǎn)品zui新報價、實驗原理、產(chǎn)品用途及中英文說明書
3、發(fā)貨及時(上海本地客戶有專門人員送貨上門及取標(biāo)本)
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四.需要的器材
儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
五.樣本處理前須知:
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
六.大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)ELISA試劑盒現(xiàn)貨操作流程
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
七.注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
八.特別說明
由于不同指標(biāo)檢測的樣本是不同的,處理方式也是不盡相同,如需了解更多,更詳細(xì)的技術(shù)參數(shù)可聯(lián)系我司客服專員,歡迎廣大社會各界朋友前來咨詢和了解。公司長期和全國各大高校、科研單位以及醫(yī)院單位保持長期合作關(guān)系,產(chǎn)品品質(zhì)保證,(非人為的)有任何質(zhì)量問題包退換,可放心購買。
【英語名稱】:Amplite Fluorimetric Goat Anti-Mouse IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence*
【中文名稱】:Amplite 熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA試劑盒 *紅色熒光*
【產(chǎn)品類型】:免疫學(xué)試劑盒【供應(yīng)商】:AAT Bioquest
【產(chǎn)品貨號】:AAT-11540
【產(chǎn)品規(guī)格】:1 個試劑盒
【背景資料】:辣根過氧化物酶(HRP)是廣泛用于多種生物學(xué)檢測的小分子(MW~40KD)。HRP偶聯(lián)物也被廣泛用作ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)、免疫組化技術(shù)、Northern、 Southern和Western blot分析的第二個檢測試劑。由于分子量小,因此在與抗體、抗原結(jié)合形成復(fù)合物時不會帶來空間阻礙。它們按4:1的比例與抗體結(jié)合。此外,與其它酶標(biāo)簽相比,HRP更便宜。
【保存建議】:對于 Amplite 熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA試劑盒 *紅色熒光* 產(chǎn)品,我們推薦使用濕冰(又稱藍(lán)冰,約-20℃)進(jìn)行運輸。在您收到貨物后,我們建議在低于-15℃溫度下冷凍保存,要求儲存環(huán)境干燥并避免光照。產(chǎn)品有效期為6個月。
【產(chǎn)品說明】:點擊:Amplite 熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA試劑盒 *紅色熒光*查看更詳細(xì)產(chǎn)品說明,更多應(yīng)用、儲存、價格、貨期等信息請致電400-6800-868垂詢AAT Bioquest中國區(qū)域授權(quán)總代理艾美捷科技有限公司。
美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest,Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域,包括顯色、熒光和生物發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助全世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué),免疫學(xué),細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。作為AAT Bioquest Inc.的中國區(qū)域代理,艾美捷科技為中國客戶提供光譜學(xué)檢測技術(shù)并應(yīng)用于生化、生理代謝和細(xì)胞分析領(lǐng)域的產(chǎn)品,包括顯色,熒光和發(fā)光技術(shù)等全系列解決方案。